Burnos barjero sulaužymas (4)

Ciklinio peptido PTG-200 atradimas ir dariniai
PTG-200 atradimas

2016 m. „Protagonist“ paskelbė patentą (WO2016011208), skirtą geriamojo polipeptido inhibitoriui, nukreiptam į IL-23R, apimantį kelias linijines ir ciklines peptidų sekas, galinčias prisijungti prie IL-23R. Pažymėtina, kad šio patento 3A lentelėje pateiktos sekos yra labai panašios į struktūras, anksčiau gautas MDL naudojant fagų ekraną. Išvardytose linijinėse peptidų sekose visų pirma yra pagrindinė struktūra -WQDYW- (kaip parodyta paveikslėlyje toliau). Tarp jų stipriausia molekulė (SEQ ID Nr. 4) pasiekė IL-23R slopinančią koncentraciją 4,1 µM, o jos struktūra susidarė acetilinant MDL peptido 23.15 N-galą.
Verta paminėti, kad 2014 m. MDL ir „Protagonist“ derėjosi dėl bendradarbiavimo dėl IL-23R peptido, kurio metu MDL pasidalino savo tyrimų informacija. 2015 metais abi šalys pasirašė konfidencialumo sutartį, tačiau tų pačių metų spalį derybos buvo nutrauktos. Vėlesni teisiniai dokumentai atskleidė, kad MDL pateikė ieškinį Protagonistui JAV apygardos teisme dėl PTG-200 patento pažeidimo, susijusio su patentais US 8946150 (MDL) ir US 9624268 (protagonistas). 2018 m. MDL ieškinys dėl patento pažeidimo buvo atmestas, nes „Protagonist“ naudojo šiuos peptidus kurdama FDA patvirtintus vaistus nuo autoimuninių ligų, kurie buvo apsaugoti pagal „saugaus uosto“ taisyklę.

Grįžtant prie šio straipsnio dėmesio, „Protagonist“ išlaikė - WQDYW pagrindinę struktūrą, kurią pasiūlė MDL vėlesnėse molekulinėse modifikacijose, tačiau ciklizacijos strategijoje pasirinko skirtingus dizainus. Jie įvedė Cys į pagrindinę seką, kad suformuotų konservuotą struktūrą - CXX-WQCYW - (pvz., - CQTWQCYW -), ir aplink šią struktūrą išvedė šimtus peptidų, padidindami aktyvumą iki nanomolių lygio (kaip parodyta toliau pateiktoje diagramoje). Be to, „Protagonist“ taip pat bandė įvairius ciklizacijos metodus, įskaitant tioeterio jungties įvedimą tarp dviejų Cys vietų, naudojant olefino metatezės reakciją (RCM) ir amido jungties ciklizacijos strategijų įgyvendinimą. Tačiau eksperimentiniai rezultatai rodo, kad peptidai, cikliški disulfidinėmis arba tioeterinėmis jungtimis, paprastai pasižymi geresniu aktyvumu nei peptidai, cikliški RCM arba amido ryšiais.

PTG-200 (junginys C) PK duomenys yra atskleisti patente: žiurkėms išgėrus 20 mg/kg dozę, junginys daugiausia pasiskirsto virškinamojo trakto audiniuose, o sisteminė ekspozicija yra labai maža. Tarp jų plonosios žarnos gleivinės AUC yra 355 μg · h/g, o storosios žarnos gleivinės – 77 μg · h/g. Tačiau AUC plazmoje yra tik 0,3 μg · h/mL, o išmatose atsistato 40 %. Šis junginys pasižymi geru stabilumu įvairiuose virškinimo trakto skysčiuose ir redukuojančioje aplinkoje: jo pusinės eliminacijos laikas yra ilgesnis nei 24 valandos imituotame žarnyno skystyje (SIF), imituotame skrandžio skystyje (SGF) ir žmogaus žarnyno skystyje, taip pat jo pusinės eliminacijos laikas yra daugiau nei 2 valandos redukuojančiame agente DTT. SPR eksperimento rezultatai parodė, kad jis nesijungia vien tik su IL-12R 1, bet gali prisijungti prie IL-23R ir IL-12R 1/IL-23R kartu išreikšto paviršiaus, su stipriu afinitetu ir KD reikšmėmis atitinkamai 2,42 nM ir 2,56 nM.

PTG-200 darinys

2017 m. „Protagonist“ paskelbė antrąjį IL-23R peptidų inhibitorių patentą (WO2017011820). Šis patentas praplečia pirmojo patento skeletą 227 išvestinėmis sekomis (SEQ ID Nr. 1030-1256) ir į ciklinį peptidą įveda struktūrinius vienetus, kurie gali pailginti pusinės eliminacijos periodą in vivo (kaip parodyta sekančiame paveikslėlyje). Farmakokinetikos tyrimai parodė, kad žiurkėms išgėrus 10mg/kg peptido Nr.1185, koncentracija plazmoje yra daug mažesnė nei plonosios žarnos ir gaubtinės žarnos mėginiuose, o išmatose atsistatymo greitis po 24 valandų siekia 20%. Saugumo įvertinimas parodė, kad peptidas NO.1185 neturėjo slopinamojo poveikio 44 taikiniams, įskaitant G baltymu susietus receptorius, transporterius ir jonų kanalus esant 10 µM.

Vėliau „Protagonist“ paskelbė keletą išvestinių patentų, pagrįstų PTG-200 arba peptido NO.1185 struktūromis, kurie dar labiau optimizavo aktyvumą ir stabilumą per struktūrinius darinius skirtingose ​​likučių vietose. Išsamią informaciją apie susijusias modifikacijas galima rasti patentuose WO2018136646, WO2020014646, WO2021007433 ir WO2021146458. Be to, Protagonist taip pat pateikė paraišką dėl patento (WO2018022937), apimančio ciklinį peptidą IL-23R inhibitorių, turintį 34 aminorūgštis, kuris šiame straipsnyje toliau nebus aptariamas.